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熒光法因其具有靈敏度高，取樣量少等特點(diǎn)，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生化、化學(xué)、藥物分析、食品檢驗(yàn)、 地理、冶金、醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)和生命科學(xué)研究等各個(gè)領(lǐng)域。熒光分析法的發(fā)展與儀器應(yīng)用的發(fā)展是密不可分的。本文介 紹了熒光分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)、分類、應(yīng)用。

熒光法的固有靈敏度高,取樣量少，檢測限通常比 吸收光譜法低1~3個(gè)數(shù)量級(jí),可達(dá)ng ﹒m l- 1級(jí)；線性范 圍也常大于吸收光譜,又有熒光壽命，熒光量子產(chǎn)率，激 發(fā)峰波長，發(fā)射峰波長等多種參數(shù)因而有較好的選擇 性[1]。但也由于熒光法的高靈敏度,使得定量熒光法引 入嚴(yán)重的基體干擾,熒光法在定量分析的應(yīng)用不如吸收 光譜法,因?yàn)槲兆贤饪梢姽獾奈镔|(zhì)種類要比吸收相應(yīng) 區(qū)域輻射而產(chǎn)生熒光的物質(zhì)多。目前熒光分析法廣泛應(yīng) 用于生化、化學(xué)、藥物分析、食品檢驗(yàn)、地理、冶金、 醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)和生命科學(xué)研究等各個(gè)領(lǐng)域。 熒光儀器是用來測定熒光物質(zhì)的性質(zhì)和含量的分 析儀器，通常分兩大類：熒光光度計(jì)和熒光分光光度 計(jì)[2]。熒光分光光度計(jì)技術(shù)在現(xiàn)代科學(xué)的發(fā)展中正顯 示出*的作用，越來越得到人們的重視。下面將對(duì) 熒光分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)，分類，發(fā)展和應(yīng)用作以簡單 介紹。 1 熒光分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu) 一般熒光分光光度計(jì)由光源、激發(fā)光源、發(fā)射 光源、試樣池、檢測器、顯示裝置等組成。 1.1 光源 光源應(yīng)具有強(qiáng)度大、適用波長范圍寬兩大特點(diǎn),常 用光源有高壓汞燈、氙燈、氙- 汞弧燈等。此外，紫外 激光器、固體激光器、高功率連續(xù)可調(diào)染料激光器和二 極管激光器等熒光光源把熒光法的應(yīng)用范圍拓寬。 1.2 濾光片和單色器 在熒光光度計(jì)中，通常采用干涉濾光片和吸收 濾光片作為激發(fā)光束和熒光輻射的波長選擇器。在熒 光分光光度計(jì)中至少選用一個(gè)，而常常是用兩個(gè)光柵 單色器，且均帶有可調(diào)狹縫，以供選擇合適的通帶。理想的單色器應(yīng)在整個(gè)波長區(qū)內(nèi)有相同的光子通 過效率，不幸的是這種理想的單色器不存在。 1.3 檢測器 一般普通的熒光分光光度計(jì)均采用光電倍增管作 為檢測器。它是很好的電流源，在一定條件下其電流 量與入射光強(qiáng)度成正比。此外，還有光導(dǎo)攝像管、電 子微分器、電荷耦合器陣列檢測器。 1.4 顯示裝置 以前，顯示裝置有數(shù)字電壓表，記錄儀和陰極示 波器等，現(xiàn)在，人們可以通過計(jì)算機(jī)軟硬件技術(shù)根據(jù) 不同要求，來選擇不同的直觀的視頻讀出方式[3]。 2 熒光分光光度計(jì)分類 熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光 度計(jì)，自動(dòng)記錄式熒光分光光度計(jì)，計(jì)算機(jī)控制式熒 光分光光度計(jì)三個(gè)階段；熒光分光光度計(jì)還可分為單光束式熒光分光光度計(jì)和雙光束式熒光分光光度計(jì)兩 大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光 度計(jì)，配有壽命和相分辯測定的熒光分光光度計(jì)等。 3 熒光分光光度計(jì)應(yīng)用 理論上，具有剛性結(jié)構(gòu)和平面結(jié)構(gòu)的分子；π電 子共軛體系的分子；給電子取代基的化合物都可用直 接熒光法測定。間接熒光法測定是目標(biāo)分析物本身不 具備熒光發(fā)射能力,但具備使某種熒光物質(zhì)熒光猝滅的 能力,或者可以通過氧化還原偶聯(lián)酶催化等手段使其轉(zhuǎn) 化為熒光物質(zhì),而進(jìn)行間接測定[4]。以下是熒光分光光 度計(jì)在現(xiàn)代各科學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用： 3.1 環(huán)境檢測領(lǐng)域: 熒光分光光度計(jì)檢測技術(shù)已經(jīng)成為環(huán)境污染監(jiān)測 中污染物定性和定量分析的有效手段。如不同類型不 同場地的石油及其產(chǎn)品成份各有不同,其熒光光譜也有 著顯著的區(qū)別,利用油標(biāo)可在激發(fā) 310nm ,發(fā)射 365 nm 處測量淤泥和海水中油污樣品中總油的含量.還可以對(duì) 機(jī)油、柴油、重油、原油及液壓油進(jìn)行初步鑒定[5]；空 氣塵埃中多環(huán)芳烴的檢測。其他如陰離子表面活性劑 作為洗滌劑污染的主要成份,葉綠素a、葉綠素b、脫鎂 葉綠素 a和脫鎂葉綠素 b 作為水環(huán)境浮游植物生物量 和水體富營養(yǎng)化的重要指標(biāo)以及多環(huán)芳烴等都可用熒 光分光光度計(jì)測量。 3.2 食品和藥物成份分析領(lǐng)域： 曾用熒光法分析食品和藥品中的化合物如：:維 生素 A 、維生素 B1、B2（核黃素）、B6 、B1 2、維 生素BC(葉酸或蝶酰谷氨酸)、維生素C、維生素D、維 生素E(生育酚)、維生素P(蘆丁)、維生素F（煙酸）、維 生素 K，抗生素藥中的青梅毒、金霉素、四環(huán)素、抗 霉素、鏈霉素和放線菌素D等以及吩噻嗪 類藥物、奎諾酮類藥物、利血平、異煙肼、6- 巰 基嘌呤等[6]。 3.3 醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)及其相關(guān)領(lǐng)域: 多種氨基酸的分析、在肌肉和心臟疾病中非常 注意細(xì)胞內(nèi)離子濃度的測定；核糖核酸（RNA）和 脫氧核糖核酸（DNA）的相關(guān)研究，如 DNA、RNA 的檢測和定量，用以鑒別病毒細(xì)菌等的 DNA/酶相互 作用研究，DNA 密碼的改變導(dǎo)致癌癥病因研究，能斷 裂DNA限制酶測定，熒光PCR(DNA的放大)的研究等; 蛋白質(zhì)和酶的作用研究，如DNA的表達(dá)、細(xì)胞膜流動(dòng) 性及細(xì)胞膜內(nèi)蛋白質(zhì)研究、涉及抗體、蛋白質(zhì)和酶的 ELISA 測定研究、酶活性測定等[7]。尤其是各種新型 蛋白和核酸熒光標(biāo)記物的引入，各種熒光酶聯(lián)免疫分 析技術(shù) 、偏振熒光測定技術(shù)以及為克服生物樣品紫外 區(qū)背景熒光和散射光的嚴(yán)重干擾而提出的近紅外區(qū)熒 光測定技術(shù)的發(fā)展，為醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域提供了豐 富的研究手段。